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            原代細胞培養(yǎng)中存在的六個錯誤做法
          • 發(fā)布日期:2018-05-24      瀏覽次數(shù):1713
            •      原代細胞培養(yǎng)與細胞株不同,兩者在培養(yǎng)過程中的操作方法也不一樣。下面是原代細胞操作過程中容易出現(xiàn)的6個錯誤及對應方法

                     1.長時間水浴解凍
                     因為原代細胞非常容易受到解凍過程的影響,所以在37℃水浴鍋中解凍時,要在水中擺動溶解。在細胞半溶后(不要等到全部溶解),迅速拿到生物安全柜或超凈臺中,用1ml的槍,抽出事先準備好的*培養(yǎng)基打入凍存管中,然后抽到培養(yǎng)瓶中,反復進行,直至*溶解
                     2.把凍存管的細胞溶解后迅速離心
                     如果原代細胞溶解后馬上離心,細胞所受的打擊可能比DMSO的毒性還要大,不建議采用這個方法。用帶有血清的*培養(yǎng)基溶解后鋪瓶,第二天換液去除DMSO。
                     3.讓原代細胞長滿(100%)瓶(皿、板)
                     原代細胞長滿后,細胞會出現(xiàn)老化。因為原代細胞不是100%的細胞團,把混入的細胞控制在zui小限度非常重要。建議細胞長到90-95%進行傳代
                     4.傳代時用大量的胰蛋白酶處理
                     原代細胞傳代時,要用低濃度的胰蛋白酶消化,在顯微鏡下看到細胞開始變圓、脫落后迅速終止胰蛋白酶。建議采用含10%血清的*培養(yǎng)基終止或大豆由來的蛋白酶終止劑終止。
                     5.細胞培養(yǎng)后再凍存
                     原代細胞再凍存后,細胞會老化、也可能引起機能變化,所以不建議再凍存。細胞再凍存也是細胞死傷的主要原因。
                     6.原代細胞無限增殖
                     原代細胞和細胞系不同,增殖能力是有限的。為了防止遺傳上的變化,應盡快開始做實驗。另外,為了防止混入雜細胞比例的增加,要經(jīng)常觀察細胞形態(tài)。

            魏經(jīng)理
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